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什么是牛血清白蛋白,他的作用、用途和保存方法有哪些?
點擊次數:6515 更新時間:2021-07-12

一、定義:
牛血清白蛋白(BSA),是牛血清中的一種球蛋白,包含607個氨基酸殘基,分子量為66.446KDa,等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應用。

二、主要成分
1、蛋白質
是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白,球蛋白。纖維粘連素細胞促進細胞附著;α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含胎球蛋白促細胞附著;轉鐵蛋白能結合鐵離子,減少其毒性和被細胞利用。
2、多肽
血小板促生長因子能促細胞分裂,是多肽家庭的主要成員之一,是主要的促細胞增殖因子;成纖維細胞生長因子、表皮細胞生長因子、神經細胞生長因子等,血清中含量雖很少,但對細胞生長也有一定作用。
3、激素
激素對細胞的作用是多方面的。
胰島素:促進細胞攝取葡萄糖和氨基酸,與促細胞分裂有關。
類胰島素生長因子:能與細胞表達的胰島素受體結合,從而有胰島素同樣的作用。
促生長激素:促細胞增殖效應。

4、其他成份
氨基酸、葡萄糖、酮酸等對多種營養成分的合成培養基意義不大。與蛋白相結合狀態的微量元素對細胞培養有意義。

三、作用
BSA一般做為穩定劑被用于限制酶或者修飾酶的保存溶液和反應液中,因為有些酶在低濃度下不穩定或活性低。加入BSA后,它可能起到保護載體作用,不少酶類添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不會受到什么影響。對多數底物DNA而言,BSA可以使酶切更*,并可實現重復切割。在37,酶切反應超過1h時,BSA可以使酶更加穩定,因為在不含BSA的反應緩沖液中,許多限制性內切酶在37下只能存活10"20min甚至更短的時間。而BSA可以結合緩沖液或底物DNA中抑制限制性內切酶活性的金屬離子和其它化學物質。

緩沖液
1.BSA是酶的穩定劑,防止酶的分解和非特異性吸附;
2.BSA能減輕有些酶的變性,能減輕有些不利環境因素如加熱,表面張力及化學因素引起的變性的,可能是因為它結構中有17個二硫鍵,和一個巰基,巰基的化學反應很活潑,二硫鍵有抗氧化還原的作用,因此可與多種陽離子,陰離子和小分子結合;
3.BSA能防止酶吸附到管壁而損失。

四、用途
1、用于生化研究、遺傳工程和醫藥研究
2、用作醫藥保健食品、調味品
3、維持滲透壓、pH緩沖、載體作用
4、在PCR體系中有助于Taq酶的穩定性及活性,可以提高PCR的效率

五、儲存方法
10克加100毫升水進行溶解,或用 PBS溶解也可,視用途而決定。然后分裝成小支。若不使用防腐劑可貯存在零下2030攝氏度的恒溫柜中,若使用防腐劑則可貯存在零上4攝氏度的環境下。一般可存放數月不變質。防腐劑可能對牛血清白蛋白的效果造成影響,應慎用。

六、應用
牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中有廣泛的應用, 例如在WB實驗中加入BSA, 通過提高溶液中蛋白質的濃度,對酶起保護作用。防止酶的分解和非特異性吸附,能減輕有些酶的變性,減輕不利環境因素如加熱,表面張力及化學因素引起的變性的。

1、測定蛋白濃度
501配置BCA工作液。10ulC液(蛋白標準)+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標準液。再分別以01248121620ul將蛋白標準液加入96孔板的第1~8標準孔中,在其他樣品孔中加入10ul待測樣品。分別加PBS定容至20ul。各孔中加入200ulBCA工作液,室溫放置2小時。用酶標儀測定蛋白濃度:測定A562,依標準曲線算出蛋白濃度。

2SDS-PAGE電泳
1)制 : 按比例配制分離膠,緩緩地搖動溶液,使激活劑混合均勻,將凝膠溶液平緩地注入兩層玻璃極中,再在液面上小心注入一層水,以阻止氧氣進入凝膠溶液中,靜置40min。同前按比例配制濃縮膠,但混勻溶液時不要過于劇烈以免引入過多地氧氣。吸去不連續系統中下層分離膠上的水分,連續平穩的注入凝膠溶液,然后小心插入梳子并注意不得在齒尖留有氣泡,靜制60min以上以保證*聚合。
2)預電泳: 將聚合好的凝膠安置于電泳槽中,小心拔去梳子,加入電泳緩沖液后低電壓10-20V的預電泳20-30min。(目的是清除凝膠內的雜質, 疏通凝膠孔徑以保證電泳過程中電泳的暢通)。
3)樣品準備:首先計算上樣體積,然后按樣品:上樣buffer=41的比例加入上樣bufer混勻,沸水10分鐘,冰上5分鐘。
4)加 樣: 預電泳后依次加入標準品(Marker)和待分析樣品。(加樣時間要盡量短,以免樣品擴散,可在未加樣的孔中加入等量的樣品緩沖液避免邊緣效應。每個泳道加5ul
5)電 泳: 加樣完畢,選擇80V恒壓進行電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿到達兩膠交界處(一般約20分鐘),更換至100V恒壓電泳,電泳直至溴酚藍染料前沿下至凝膠末端處,即停止電泳(一般約為1小時20分鐘)。

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